تمت مناقشة اطروحة دكتوراه في جامعة تكريت /كلية العلوم للطالب(حيدر مظهر عباس عبد العزاوي) و الموسومه(In Vivo And In Vitro Effects Of BV In Normal And Transformed Cells) وقد صممت الدراسة بهدف تقييم تأثير سم النحل داخل جسم الكائن الحي وخارج الجسم باستخدام الفئران البيضاء السويسرية.انجزت الدراسة الحالية في مختبرات كلية العلوم جامعة تكريت - قسم علوم الحياة ، أما الجزء الخاص بتجارب الخطوط الخلوية السرطانية والطبيعية فقد انجزت في مختبرات ( مركز ابحاث التقنيات الاحيائية / جامعة النهرين ) للفترة من 1/4/2018 الى غاية 17/10/2020تم تقدير السمية الوراثية والسمية الخلوية للجرعات ( 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 ،50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، لسعتين ، لسعة واحدة ، مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة والسيطرة السالبة ) بالاعتماد على مؤشرات الوراثة الخلوية MN في كريات الدم الحمراء الغير ناضجة لخلايا نقي العظم ، الشذوذ الكروموسومي في الخلايا الجسمية لخلايا نقي العظم والخلايا الابتدائية المولدة للنطف ، وتقدير تلف الدنا باستخدام تقنية تقدير الهالة comet assay في الفئران البيضاء ، فضلا عن دراسة تأثير سم النحل على الخطوط الخلوية الطبيعية والسرطانية باستخدام اختباري MN وتقدير تلف الدنا باستخدام تقنية Comet assay .
أظهرت النتائج زيادة معنوية في قيم الفروق المتوسطة في كريات الدم الحمراء المتعددة الانوية والمحتوية على النوى الصغرى لخلايا نقي العظم في المجموعات المعالجة بسم النحل. تم تسجيل أعلى قيمة عند الجرعة 225 ميكروغرام / كجم. كان 67.8 ± 15.7 ، كانت هناك زيادة معنوية في متوسط قيم نوى النوى في المجموعات المعالجة بسم النحل( ( BV sting 1 , BV sting 2, 75 µg.kg-1, 150 µg.kg-1, 225 µg.kg-1 and use MTC as positive control ) ) بلغ ( 6 ± 15.7 ، 61.0 ± 15.7 ، 49.4 ± 15.7 ، 61.6 ± 15.7 ، 30.2 ± 15.7 ، 63.8 ± 15.7 ) على التوالي.
أوضحت النتائج أن لسم النحل تأثيراً انتيوجينيا وكلاستوجينيا ً في خلايا الفئران البيضاء في نخاع العظم ، وأظهرت نتائج الدراسة أن هناك زيادة معنوية في قيم الفروق المتوسطة في التشوهات العددية للكروموسومات. وصلت إلى أعلى قيمة للجرعات عند جرعة ( BV sting 1 , BV sting 2, 75 µg.kg-1, 150 µg.kg-1, 225 µg.kg-1 and use MTC as positive control ) (3.2 1.68, 9.6 1.68, 1.6 1.68, 6.8 1.68, 14.2 1.68 and 27.2 1.68 ) على التوالي زيادة معنوية في الفروق المتوسطة للتشوهات التركيبية مع الفجوات بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة والتي بلغت 8.6 ± 2.07 ، وبلغت أعلى قيمته عند الجرعة ( BV sting 1 , BV sting 2, 75 µg.kg-1, 150 µg.kg-1, 225 µg.kg-1 and use MTC as positive control )( 15.8 2 , 38.2 2, 7.6 2, 27.8 2, 54.2 2 and 117.8 2 ) على التوالي بينما الشذوذ التركيبي بعد استبعاد الفجوات عند مقارنتها بمجموعة التحكم السالبة والتي بلغت 5 ± 1.58 أعلى قيمة كانت تم الوصول إليه بالجرعة ( BV sting 1 , BV sting 2, 75 µg.kg-1, 150 µg.kg-1, 225 µg.kg-1 and use MTC as positive control ) ( 11.6 2.1, 23.4 2.1, 5.4 2.1, 18 , 34.6 2.1 and 86.8 2.1 )على التوالي.
استحثت الجرعات المستخدمة من سم النحل في احداث الشذوذ الكروموسومي في الخلايا الابتدائية المولدة للنطف ، اذا بلغت قيمة الشذوذ العددي في الدور الازدواجي Diakinesis من الطور الاستوائي الأول من المجاميع المعاملة بسم النحل مقارنة بالسيطرة السالبة التي كانت قيم المتوسطات فيها( 0.00 ± 0.00) تلتها المعاملات التالية ( لسعة واحدة ، لسعتين ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، 50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة ) كانت ( 3.4 ± 1.6، 10.4± 1.6، 1.6 ± 1.6، 7.2 ± 1.6 ، 15.2 ± 1.6 و 28.8 ± 1.6) على التوالي ، بينما بلغت قيم متوسطات فروق الشذوذ الكروموسومي التركيبي في الدور الازدواجي Diakinesis من الطور الاستوائي الأول مقارنة بالسيطرة السالبة التي كانت قيم المتوسطات فيها( 8.6 2.07) تلتها المعاملات التالية ( لسعة واحدة ، لسعتين ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، 50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة ) كانت ( 15.6 ، 38.2 ، 7.6 ، 27.8 ، 54.2 و 117.8 ) على التوالي.
وجد فروق ذات دلالة إحصائية في القيم المتوسطة للاختلافات في خلايا نخاع العظم باستخدام DNA damage comet assay عند مقارنتها بالسيطرة السالبة (27.4 ± 14.51 ، 14.8 ± 14.51 ، 5.4 ± 14.51 ، 45.4 ± 14.51 ، 10.0 ± 14.51 ، 65.8 ± 14.51 و 0.83 ± 3.80) ( 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 ،50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، لسعتين ، لسعة واحدة ، مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة والسيطرة السالبة )على التوالي ، بينما اختلافات كبيرة في متوسط الفروق في خلايا الكلية باستخدام DNA damage comet assay عند مقارنته بنتائج بالسيطرة السالبة (28.8 ± 0.92 ، 15.6 ± 0.92 ، 14.6 ± 0.92 ، 18.2 ± 0.92 ، 15.0 ± 0.92 ، 67.4 ± 0.92 و 0.89 ± 3.40) ( 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 ،50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، لسعتين ، لسعة واحدة ، مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة والسيطرة السالبة ) على التوالي ، كما توجد فروق ذات دلالة إحصائية في القيم المتوسطة للاختلافات لخلايا الكبد باستخدام DNA damage comet assay عند مقارنتها بالسيطرة السالبة 30.4 ± 1.3 ، 18.2 ± 1.3 ، 14.8 ± 1.3 ، 19.2 ± 1.3 ، 15.2 ± 1.3 ، 77.4 ± 1.3 و 1.00 ± 4.00) ( 75% من الجرعة المميتة النصفية 225 مايكروغرام/كغم-1 ،50 % من الجرعة المميتة النصفية 150 مايكروغرام /كغم-1 ، %25 من الجرعة المميتة النصفية 75 مايكروغرام / كغم-1 ، لسعتين ، لسعة واحدة ، مقارنة بالمايتومايسين كسيطرة موجبة والسيطرة السالبة ) على التوالي.
عوملت الخلايا السرطانية والخلايا الطبيعية بخمس تراكيز من سم النحل بثلاث مدد تعرض لمدة 24 ساعة و 48 ساعة و 72 ساعة. كانت التراكيز المستخدمة هي (3 ميكروغرام / مل ، 30 ميكروغرام / مل ، 75 ميكروغرام / مل ، 150 ميكروغرام / مل و 300 ميكروغرام / مل) ، وكذلك خلايا كل خط خلوي ، التمريرات ، ونفس أوقات التعرض. عوملت بتركيز 0.05 ميكروغرام / مل من MTC لتقدير التثبيط الناتج عن العلاج. بالمقارنة مع السيطرة الموجبة والسالبة ، تم تحديد ثلاثة تراكيز للمعاملات التالية.
تم استخدام التركيزات الثلاثة المختارة بعد ضبط التركيز المثبط 50٪ (IC50) للخلايا إذا عوملت المزارع بهذا التركيز والتركيزين الأدنى والأعلى بفاصل زمني مساوٍ للجذر التربيعي لقيمة IC50 لغرض إجراء دراسة لتثبيط نمو الخلايا واختبار النواة الدقيقة DNA damage comet assay واستخدام MTC كسيطرة موجبة.
