نوقشت في جامعة تكريت-كلية التربية للبنات اطروحة دكتوراه للطالبة رحاب سلمان كردي والموسومة(تحديد الفعالية التثبيطية لبعض المستخلصات الفطرية تجاه الانواع البكترية المرضية المعزولة من مصادر اخماج مختلفة والكشف جزيئا في قدرتها في تحيد عوامل الضراوة)و قد بينت الباحثة اهداف الدراسة في النقاط الاتية:
1- الكشف مظهرياً وجزيئياً عن قدرة الأنواع البكتيرية قيد الدراسة على إنتاج بعض عوامل الضراوة وتحديد جيناتها باستخدام بادئات متخصصة Specific primers اعتماداً على تقنية PCR .
2- تحديد تسلسلات القواعد النيتروجينة ومطابقتها مع البنك الدولي للجينات NCBI فضلاً عن تسجيلها عالمياً ورسم الخارطة الوراثية للعزلات المشخصة جزيئياً.
3- التعرف على تأثير مستخلص الفطر الرشي Ganoderma lucidum على نمو بعض انواع البكتريا المقاومة المعزولة أثناء الدراسة.
4- التعرف على المحتوى الفعال (لاسيما القلويدات) للعرهون G. lucidum وعزلها بصورة نقية بوساطة جهاز HPLC .
5- تحديد تأثير مستخلص الفطر الرشي (Ganoderma lucidum) على بعض عوامل الضراوة التي تمتلكها البكتريا المعزولة .
6- تحييد عوامل الضراوة للبكتريا المعزولة من خلال تأثير المستخلص الفطري على الجينات المسؤولة عن هذه العوامل.
حيث تم أخذ العينات من فئات عمرية مختلفة تتراوح بين20-50سنة ومن كلا الجنسين. وقد تبين ان عدد العينات التي أعطت نمواً بكتيرياً موجب هي 138 عينة أي بنسبة (69%) من مجموع العينات الكلي من ضمنها، في حين أن 62 عينة لم تعطِ نمواً بكتيرياً وبنسبة %31 من مجموع العينات الكلي, وتم تأكيد التشخيص باستعمال جهاز 2 Vitek compact system إذ تم تشخيص 7 نوع من البكتريا السالبة و 9 نوع من البكتريا الموجبة ، التي تضمنت 25عزلة بنسبة 18.8% Escherichia coli ثم تليها بكتريا Staphylococcus aureus ب 20 عزلة ونسبة14.4% بعدها بكتريا Staph. Epidermidis بمقدار 19 عزلة ونسبة 13.7% و بكتريا staph.saprophyticus 15عزلة بنسبة 10.8%و Klebsiella pneumonia11 عزلة بنسبة 8%واما بكتريا Pr.v sو Pse. aeruginosaو Se.marcescensفكان عدد العزلات 5 بنسبة 3.7%اما Pr. Mirabilis
و Faecalis Enterococcus و Strep.pneumoniae فكان عدد العزلات 4 وبنسبة 2.9%اما Acinetobacter baumannii و Staph.lentus و Strep.pyogenes فكان عدد العزلا 3 بنسبة 2.1%اما بكتريا Staph.lentus فكانت عزلتين بنسبة 1.4%.
تم التحري عن قابلية العزلات على إنتاج بعض عوامل الضراوة التي تتضمن protease, Biofilm, Gelatinase, Lipase, Lecithinase, Urease, Hemolysin فقد تبين أنّ Staph. aureus محللة للدم بنسبة 90% ومكونة للغشاء الحيوي بنسبة 50% ومنتجة لليوريز بنسبة 20% ومكونه لل cnfبنسبة 40% و اللايبيز والليستينيز بنسبة 25% و 30% على التوالي فيما أشضذششظهر ان Proteus mirabilis منتجة لانزيمات الهيمولايسين واليوريز ومكونة للغشاء الحيوي بنسبة 50% ومنتجة واللايبيز بنسبة 75% اما E. coli فكانت منتجة لكل من والهيمولايسين واللايبيز والغشاء الحيوي واليوريز بنسبة40% و 8% و 8% و 12% و على التوالي اما Ps. aeruginosa فكانت منتجة لكل من الغشاء الحيوي وليسثنيز والهيمولايسين بنسبة 40% وcnf بنسبة 80% و منتجة لليوريز بنسبة 20%
اختبرت حساسية العزلات البكتيرية لـ 12 نوع من أنواع المضادات الحيوية التي شملت مضادات الكينولونات, الامينوكلايكوسيدات, مضادات البيتالاكتام ومضادات التتراسايكلين. المضادات imipenem و levofloxacin كانت أكثر فعالية بينما تراوحت فعالية المضادات الاخرى ما بين فعالية متوسطة إلى عدم الفعالية.
تم جمع الفطر Ganoderma lucidum (من ناحية العلم/محافظة صلاح الدين شمالي- وسط العراق ) بين الفترة اَب 2021- أيلول 2021. أظهرت نتائج الكشف الكيميائي احتواء مستخلص الفطر Ganoderma lucidumعلى المركبات وهي كل من القلويدات Alkaloids, الفينولات Phenols, الصابونيات Saponins الفلافونات Flavonoids, التربينات Terpenes،أما التركيز الكلي للمستخلص الفطري Ganoderma lucidum فقد بلغ 825.37 ملغم | مل قديم (مخفف) و 492.2 ملغم | مل فتي (مخفف) ،و التحليل الكيميائي لمحتوى الفطر Ganoderma lucidum (قديم) سجل المركب lucidimine Bأعلى تركيز في الفطر حيث بلغ 452.39 ملغم /مل وبنسبة 76.35% ، تلاه Sinensine بلغ بتركيز78.37وبنسبة 13.23%، وبعدها ganoine بلغ 30.99وبنسبة 5.23%، وبعدها lucidimine Cبلغ 23.04 وبنسبة3.89 % ،وأخيراً Ganodine بلغ 7.798 وبنسبة 1.32 %بينما تحليل المحتوى الكيميائي للفطر(فتي) فكان المركب Ganoine أعلى تركيزاً في الفطر Ganoderma lucidum بلغ 461.81 بنسبة 84.35 % يليه Sinensine بلغ 385.19بنسبة 40.5 %، وبعدها lucidimine C بلغ 57.007 بنسبة 5.99 %، بعدها Ganodine بلغ 41.006 بنسبة 4.32%، وأخيراً المركب lucidimine B بنسبة 5.297 بنسبة0.56% تم اختبار الفعالية التثبيطية لمستخلص الأيض الثانوي لفطر Ganoderma lucidum تجاه عشرين نوعاً مختلفاً من البكتريا قيد الدراسة والتي امتازت بمقاومتها المتعددة للمضادات الحيوية، فكانت أعلى فعالية تثبيطية تجاه البكتريا Staph.epidermidis بقطرتثبيط 30 ملم للمستخلص المائي للفطر القديم بطريقة الغليان لكلا المدتين72و24ساعة بتركيز 2% اما بتركيز 3%فكان اعلى قطر تثبيط على بكتريا Staph.epidermidisبقطر 36ملم، اما الفعالية التثبيطية للمستخلص المائي للفطر القديم بطريقة الاضافة لمدة 24و72 بتركيز2%، فكان اعلى قطر تثبيط على بكتريا Enterococcus faecium1بقطر30ملم اما بتركيز 3% فكان اعلى تثبيط على بكتريا 1Ser. mar بقطر 27ملم اما مستخلص الفطر الفتي بطريقة التنقيع بالماء المغلي لكلا المدتين72 و24 ساعة بتركيز 3% فسجل اعلى فعالية تجاه كل من بكتريا E.coilبقطر تثبيط 36 ملم.اما مستخلص الايض الثانوي الكحولي لفطر Ganoderma lucidum القديم بتركيز 100% ولمدة 24ساعة فكانت اعلى فعالية تثبيطية تجاه بكتريا Staph. lentusبقطر 28ملم.تم معاملة عزلات من النوع E. coli, وعزلة من كل من P. aeruginosa و Staph. aureus وعزلة واحدة لبكتريا P. mirabilis المنتجة لعوامل الضراوة المذكورة انفاً بتراكيز (0,002.0,003) mg/ml من المستخلص الفطري الفطر Ganoderma lucidum. وقد بينت النتائج فقدان هذه العزلات المنتخبة لعوامل ضراوتها مظهريا. ظهر التحري باستعمال تفاعل البلمرة المتسلسل وجود بعض جينات الضراوة المتمثلة بـ (pelA, aprA, plcH ) في بكتريا Pseudomonas aeruginosa وجينات (Cnfl, ure, hlyA) في بكتريا Escherichia coli كما تم التحري عن وجود اثنين من جينات الضراوة في Staphylococcus aureus وهما icaA وureR في Proteus وللتحري عن تأثير المستخلص الفطري للفطر Ganoderma lucidum جزيئياً تم اخضاع الجينات المسؤولة عن أنتاج عوامل الضراوة تلك لتقنيةPCR . وقد بينت النتائج أن الجينات المحمولة على البلازميدات فقدت بعد المعاملة بينما لم تتأثر الجينات الكروموسومية بتلك الدقائق. وقد تم إرسال نواتج تفاعل PCR إلى جمهورية كوريا الجنوبية من أجل تحديد تسلسل الجينات التي تم الحصول عليها ومطابقتها مع التسلسلات Sequencing الموجودة على قاعدة البيانات في NCBI وقد وجدت نسبة تطابق بلغت(98-100)% فيما بينها وبنسبة خطأ 0% ، وباستعمال برامج مُعَّدة ومخصَّصة لهذا الغرض.
